Phenotypic and genotypic approaches for detection of anthelmintic resistant sheep gastrointestinal nematodes from Brazilian northeast / Abordagens fenotípica e genotípica para detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de ovinos no nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to characterize the anthelmintic resistance (AR) of a sheep gastrointestinal nematode population, named Caucaia, from northeastern Brazil. Phenotypic tests performed were: egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg count reduction (FECRT). Benzimidazoles (BZs) genotypic evaluation was by frequency of single nucleotide polymorphisms (SNPs) F200Y, F167Y and E198A, and for levamisole (LEV), by frequency of resistance alleles of Hco-acr-8 gene. The primers were designed specifically for Haemonchus contortus. Effective concentrations 50% (EC50) for BZs (EHT), and for macrocyclic lactones (MLs) and LEV (LDT) were 1.02 µg/mL, 1.81 ng/mL and 0.04 µg/mL, respectively. Resistance ratios for MLs and LEV were 0.91 and 3.07, respectively. FECRT efficacies of BZs, MLs, monepantel (MPTL) and LEV were 52.4; 87.0; 94.5 and 99.6%, respectively. qPCR for BZs demonstrated resistance allele frequencies of 0%, 26.24% and 69.08% for SNPs E198A, F200Y and F167Y, respectively. For LEV, 54.37% of resistance alleles were found. There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and agreement between LDT and qPCR for LEV. Thus, based on higher sensitivity of qPCR, and phenotypic evaluation, the Caucaia population was considered resistant to BZs, MLs, LEV and suspect for MPTL.

Resumo O objetivo deste estudo foi caracterizar a resistência anti-helmíntica (RA) da população de nematoides gastrintestinais de ovinos, denominada Caucaia, do Nordeste brasileiro. Os testes fenotípicos foram: eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF). A avaliação genotípica para benzimidazóis (BZs) foi por frequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) F200Y, F167Y e E198A; e para levamisol (LEV), pela frequência alélica para resistência no gene Hco-acr-8. Os "primers" foram específicos para Haemonchus contortus. As concentrações efetivas 50% (CE50) para BZs (TEO) e para lactonas macrocíclicas (LMs) e LEV (TDL) foram 1,02 µg/mL, 1,81 ng/mL e 0,04 µg/mL, respectivamente. Os fatores de resistência para LMs e LEV foram 0,91 e 3,07, respectivamente. As eficácias para BZs, LMs, monepantel (MPTL) e LEV no TRCOF foram 52,4; 87,0; 94,5 e 99,6%, respectivamente. A qPCR para BZs demonstrou frequências de 0%, 26,24% e 69,08% para SNPs E198A, F200Y e F167Y, respectivamente. Para LEV foram encontrados 54,37% de alelos resistentes. Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. Baseada na maior sensibilidade da qPCR e avaliação fenotípica, a população Caucaia foi considerada resistente a BZs, LMs, LEV e suspeita para MPTL.

Macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. infection in tissues of cattle and sheep / Aspecto Macroscópico, histológico e molecular de Sarcocystis spp. em tecidos de bovinos e ovinos

Abstract The macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. were examined in the tissues of two cattle and four sheep, 16 and eight fragments analyzed respectively, condemned in the slaughterhouse. All 24 samples were collected and analyzed for detecting macrocysts and macroscopic lesions. Subsequently, subdivided for direct examination, polymerase chain reaction and histopathological examination. All sheep tissues samples had grossly white round to oval tissue cysts, ranging from 0.3 to 1 cm in diameter. In contrast, cattle tissues did not present grossly visible cysts but had randomly distributed white-yellow foci with irregular contours. All samples from cattle and sheep had microscopic cysts. In the histological examination of sheep tissues, circular to elongated, encapsulated, basophilic structures ranging from 30 to 3,000 µm in length and 20 to 1,000 µm in width were observed within the skeletal muscle fibers. In cattle tissues, all cardiac muscle four fragments analyzed contained circular to elongated basophilic structures inside cardiomyocytes and in some Purkinje fibers. PCR were performed using the primers: 2L and 3H. In conclusion, all 24 tissues were infected with Sarcocystis spp., and S. gigantea (in sheep) and S. cruzi (in cattle). were the identified species by sequencing.

Resumo Os aspectos macroscópicos, histológicos e moleculares de Sarcocystis spp. foram examinados nos tecidos de dois bovinos e quatro ovinos, 16 e oito fragmentos analisados, respectivamente, condenados no matadouro. Todas as 24 amostras foram coletadas e analisadas para detecção de macrocistos e lesões macroscópicas. Posteriormente, subdivididas para exame direto, reação em cadeia da polimerase e exame histopatológico. Todas as amostras de tecidos de ovelha apresentavam cistos grosseiramente visíveis, caracterizados como brancos, de redondos a ovais e estruturas variando de 0,3 a 1 cm de diâmetro. Em contraste, os tecidos de bovinos não apresentavam cistos grosseiramente visíveis, mas tinham focos branco-amarelos com contornos irregulares, distribuídos aleatoriamente. Todas as amostras de bovinos e ovinos apresentavam cistos microscópicos. No exame histológico de tecidos ovinos foram observadas estruturas basofílicas circulares a alongadas, encapsuladas, variando de 30 a 3.000 µm de comprimento e 20 a 1.000 µm de largura dentro das fibras do músculo esquelético. Nos tecidos de bovinos, todos os quatro fragmentos de músculo cardíaco analisados continham estruturas basofílicas circulares a alongadas, dentro dos cardiomiócitos e em algumas fibras de Purkinje. PCRs foram realizadas utilizando-se os "primers" 2L e 3H. Em conclusão, todos os 24 tecidos estavam infectados com Sarcocystis spp., sendo S. gigantea (em ovinos) e S. cruzi (em bovinos) as espécies identificadas por sequenciamento.

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em ovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: prevalência e fatores associados

Abstract The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram "algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo)" (OR=0,53) para T. gondii e "presença de mão de obra especializada" para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram "presença de gatos" para T. gondii (OR=1,75) e "alimentação de cães com resíduos placentários" (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.

Anthelmintic resistance of Haemonchus contortus from sheep flocks in Brazil: concordance of in vivo and in vitro (RESISTA-Test©) methods / Resistência anti-helmíntica de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos no Brasil: concordância de métodos in vivo e in vitro (RESISTA-Test©)

Abstract This study evaluated the resistance status of Haemonchus contortus from sheep flocks in the state of São Paulo, Brazil, through comparison between the fecal egg count reduction test (FECRT) and the larval development test (LDT). For the FECRT, 35 sheep were selected in each of five flocks and divided into groups treated with: benzimidazole, levamisole, ivermectin, monepantel and control. Feces were collected for EPG and fecal cultures. The LDT was performed using thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin aglycone (IVM-A) and Zolvix (ZLV). Resistance to all drugs was detected using FECRT in 100% of the flocks, except in relation to ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT indicated resistance to TBZ and IVM-A in all flocks, to LEV in 80% of flocks and to ZLV in 10%. Total agreement was obtained between the two tests for TBZ and IVM (k = 1.0), while for LEV (k = 0.8) and ZLV (k = 0.9), substantial and almost perfect agreement were obtained, respectively. The concordance between the tests was significant, thus showing that it is possible to use the outcome of the LDT to predict the FECRT, and hence validating the former as a fast diagnostic test for use by sheep farmers in Brazil.

Resumo Este estudo avaliou o status de resistência de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos do estado de São Paulo, Brasil, através de um estudo comparativo entre o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e o teste de desenvolvimento larvar (TDL). Para o TRCOF, 35 ovinos foram selecionados em cada um dos cinco rebanhos e divididos em grupos tratados com: benzimidazol, levamisol, ivermectina, monepantel e controle. Fezes foram coletadas para OPG e coproculturas. O TDL foi realizado com tiabendazol-TBZ, levamisol-LEV, ivermectina aglicona-IVM-A e Zolvix-ZLV. Resistência a todos os fármacos foi detectada por meio do TRCOF em 100% dos rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). O LDT indicou resistência ao TBZ e IVM-A em todos os rebanhos; em 80% dos rebanhos ao LEV e 10% ao ZLV. Foi obtida concordância total entre os dois testes para TBZ e IVM (k = 1,0), enquanto para LEV (k = 0,8) e ZLV (k = 0,9) foram obtidas concordância substancial e quase perfeita, respectivamente. A concordância entre os testes foi significante, sendo possível usar o resultado do LDT para prever o do TRCOF, validando-se o primeiro como um teste diagnóstico rápido para criadores de ovinos no Brasil.

Situation of and phenotypic markers of susceptibility to helminth infection among sheep on farms in the Brazilian cerrado biome / Diagnóstico de situação e marcadores fenotípicos das parasitoses gastrintestinais em ovinos de fazendas localizadas no Distrito Federal: bioma cerrado brasileiro

Abstract This study aimed to determine the intensity, seasonality, and distribution by genera of, as well as to identify phenotypic markers of susceptibility to, gastrointestinal parasites among sheep on farms within the Brazilian savanna (cerrado) biome. We evaluated 1271 sheep, on seven farms, during the rainy season (in December 2017 and December 2018) and dry season (in July 2018 and July 2019). Parasitological evaluation was based on culture and EPG. We calculated hematocrit, as well as the body condition score and feces score. Of the sheep evaluated, 34.15% had moderate-to-severe parasitic infection. The factors of herds' phenotypic characterization about helminth infections were (p ≤ 0.05 for all): anemia (OR = 5.72); leanness (OR = 1.80); loose stools or diarrhea (OR = 1.54); breed other than Santa Inês (OR = 2.31); "weaned lamb" category (OR = 4.76); "lambing ewe" category (OR = 4.66); and dry season (OR = 2.37). Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum, and Cooperia accounted for 76.40%, 20.23%, 2.89%, and 0.47%, respectively, of the helminth genera identified, with their proportional distributions being comparable between the rainy and dry seasons. Changes in health management, with regard to helminth infection control, are urgently needed in order to combat the disease more effectively and sustainably.

Resumo A presente pesquisa objetivou determinar a intensidade, sazonalidade, predominância de gêneros e marcadores fenotípicos às parasitoses gastrointestinais em fazendas de criação de ovinos do Distrito Federal, no bioma cerrado brasileiro. Foram avaliados 1.271 ovinos oriundos de sete propriedades, durante os períodos chuvoso (dezembro de 2017 e dezembro de 2018) e seco (julho de 2018 e julho de 2019). Procedeu-se a avaliação parasitológica por coprocultura e OPG, dosagem de hematócrito, escore de condição corporal e de fezes. Dos indivíduos avaliados, 34,15% deles apresentaram infecção parasitária moderada a grave. Os fatores de caracterização fenotípica dos rebanhos quanto às infecções helmínticas (p ≤ 0,05), foram: anemia (OR = 5,72),magreza (OR = 1,80), fezes pastosas/diarreicas (OR = 1,54), raças distintas à raça Santa Inês (OR = 2,31), categorias de produção animal "jovens" (OR = 4,76) e "fêmeas paridas" (OR = 4,66), e período seco (OR = 2,37). Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum e Cooperia foram os gêneros de helmintos observados nas seguintes proporções: 76,40%, 20,23%, 2,89% e 0,47%, respectivamente, sem distinção em sua distribuição entre os períodos chuvoso e seco. Mudanças no manejo sanitário com relação às helmintoses são urgentemente necessárias, para um controle da doença de forma mais eficaz e sustentável.

Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in domestic cattle, sheep, goats and pigs from São Tomé and Príncipe / Soroepidemiologia de Toxoplasma gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos domésticos de São Tomé e Príncipe

Abstract Despite the global importance of the zoonotic parasite Toxoplasma gondii, little is known regarding its infection in the Democratic Republic of São Tomé and Príncipe (DRSTP). This is the first report of antibodies to T. gondii in cattle, sheep, goats and pigs from the DRSTP. Antibodies were assessed by the modified agglutination test (MAT), with a cut-off titer of 100 for cattle and 20 for sheep, goats and pigs. The present study revealed an overall seroprevalence of 55.8%; 27.1% in 48 cattle, 68.4% in 98 sheep, 70.1% in 97 goats and 43.7% in 103 pigs. The south geographical area for cattle, the central area for sheep, and adult age and living in the central region for goats were found to be risk factors for seropositivity to T. gondii. These results support the scenario of a considerable presence of sporulated oocysts as well as of infected intermediate hosts in the local environment. Consumption of raw or undercooked meat should be considered as an important potential source of infection for animals and humans in the DRSTP.

Resumo Apesar da importância global do parasita zoonótico Toxoplasma gondii, pouco se conhece sobre sua infecção na República Democrática de São Tomé e Príncipe (RDSTP). Esse é o primeiro relato de anticorpos para T. gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos da RDSTP. Os anticorpos foram pesquisados pelo teste de aglutinação direta modificada (TADM), com um título de corte de 100 para bovinos e de 20 para ovinos, caprinos e suínos. O presente estudo revelou uma soroprevalência global de 55,8%: 27,1% em 48 bovinos, 68,4% em 98 ovinos, 70,1% em 97 caprinos e 43,7% em 103 suínos. A área geográfica sul para os bovinos, a área central para os ovinos, bem como a idade adulta e a região central para os caprinos foram considerados fatores de risco para soropositividade a T. gondii. Esses resultados suportam o cenário de uma considerável presença de oocistos esporulados, bem como de hospedeiros intermediários infectados no ambiente local. O consumo de carne crua ou mal passada deve ser considerado como uma importante fonte potencial de infecção para animais e seres humanos na RDSTP.

First molecular detection of Mycoplasma ovis (Hemotropic mycoplasmas) from Sheep in Brazil / Primeira detecção molecular de Mycoplasma ovis (Micoplasmas Hemotrópicos) em Ovinos no Brasil

Abstract Mycoplasma ovis is an emerging zoonotic pathogen with a worldwide distribution and can cause mild to severe hemolytic anemia, icterus, and poor weight gain in animals. Although M. ovis has been described in small ruminants worldwide, data on M. ovis in sheep in Brazil is unknown. The objective of the present study was to present the first report of hemotropic mycoplasma (HM) in sheep from Brazil. We evaluated factors associated with this infection, such age group, tick presence, and anemia. Blood samples were collected from 33 sheep from a farm in southern Brazil and screened for hemoplasmas using PCR. Out of 33 samples, 26 (78.8%) tested positive for M. ovis. The sequencing of positive samples showed 100% identity with multiple M. ovis 16S rDNA sequences. No association was observed between the presence of M. ovis and the FAMACHA© score (p = 0.620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45.4%) was the tick species found on the animals. No significant association between M. ovis infection and presence of ticks (p = 0.4134) and age group (p = 0.4221) was observed. This is the first report of M. ovis infection in sheep from Brazil and only the second report of this pathogen in sheep in Latin America.

Resumo Mycoplasma ovis é um patógeno zoonótico emergente com distribuição mundial e pode causar anemia hemolítica de leve a grave, icterícia e baixo ganho de peso em animais. Embora M. ovis tenha sido descrito em pequenos ruminantes em todo o mundo, os dados sobre M. ovis em ovinos no Brasil são desconhecidos. O objetivo deste estudo foi apresentar o primeiro relato de micoplasmas hemotrópicos em ovinos no Brasil. Avaliamos os fatores associados a essa infecção, como faixa etária, presença de carrapatos e anemia. Amostras de sangue foram coletadas de 33 ovelhas de uma fazenda no sul do Brasil e testadas para hemoplasmas usando a PCR. Das 33 amostras, 26 (78,8%) apresentaram resultado positivo. O sequenciamento das amostras positivas mostrou 100% de identidade com múltiplas sequências de M. ovis 16S rDNA. Não foi observada associação entre a presença de M. ovis e o escore FAMACHA© (p = 0,620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45,4%) foi a espécie de carrapato encontrada nos animais. Não houve associação significativa entre infecção por M. ovis e presença de carrapatos (p = 0,4134) e faixa etária (p = 0,4221). Este é o primeiro relato de infecção por M. ovis em ovinos no Brasil e o segundo relato deste patógeno em ovinos na América Latina.

Serological diagnosis and risk factors for Coxiella burnetii in goats and sheep in a semi-arid region of Northeastern Brazil / Diagnóstico sorológico e fatores de risco para Coxiella burnetii em caprinos e ovinos da região semiárida do nordeste do Brasil

Abstract Coxiella burnetii is a zoonotic agent transmitted mainly by small ruminants. In Brazil the disease has been classified as a notifiable disease since 2013, when human cases were reported. This study aimed to identify risk factors associated with the presence of anti- Coxiella burnetii antibodies in goats and sheep in a semiarid region of Northeastern Brazil. Sera of 412 goats and 403 sheep from municipality of Petrolina, Pernambuco, were examined by the Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) against antigens of C. burnetii. Information about management variables (independent variables) that could be associated with the presence of the microorganism (dependent variables) were obtained from the supervisor of each farm. It was determined that 2.2% (9/412) of the goats and 2.1% (9/403) of the sheep had antibodies reactive to C. burnetii. The presence of anti-C. burnetii antibodies was associated with the dry area of the Sequeiro (a region in the northern part of the municipality of Petrolina) (P = 0.025), male sheep (P = 0.020), and intensive goat breeding (P = 0.005). This study therefore showed the presence of anti-C. burnetii antibodies in goat and sheep, confirming for the first time that this agent is likely circulating among goat herds in the Caatinga Biome, semi-arid of Brazil.

Resumo Coxiella burnetii é um agente zoonótico transmitido principalmente por pequenos ruminantes. No Brasil, a doença foi classificada como de notificação compulsória desde 2013, quando casos humanos foram relatados. O objetivo deste estudo foi identificar os fatores de risco associados à presença de anticorpos anti-Coxiella burnetii em caprinos e ovinos em uma região semiárida do Nordeste do Brasil. Este estudo envolveu um inquérito sorológico de 412 caprinos e 403 ovinos em fazendas do município de Petrolina, no estado de Pernambuco. Os soros foram examinados pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) contra antígenos de C. burnetii . Informações sobre variáveis ​​de manejo (variáveis ​​independentes) que poderiam estar associadas à presença do microrganismo (variáveis ​​dependentes) foram obtidas do proprietário de cada fazenda. Foi determinado que 2,2% (9/412) dos caprinos e 2,1% (9/403) dos ovinos tinham anticorpos reativos a C. burnetii. A presença de anticorpos anti-C. burnetii foram associados com a área seca do Sequeiro (região no norte do município de Petrolina) (P = 0,025), ovinos machos (P = 0,020) e criação intensiva de caprinos (P = 0,005). Este estudo, portanto, observou a presença de anticorpos anti-C. burnetii em pequenos ruminantes, confirmando pela primeira vez que este agente pode estar circulando em rebanhos caprinos no bioma Caatinga, semiárido do Brasil.

Helminth infections and hybridization between Haemonchus contortus and Haemonchus placei in sheep from Santana do Livramento, Brazil / Infecções helmínticas e hibridização entre Haemonchus contortus e Haemonchus placei em ovinos criados em Santana do Livramento, Brasil

Abstract The occurrence and intensity of helminth infections were evaluated in sheep from pastures shared with cattle. In 2015 and 2016, young male sheep acquired in Santana do Livramento, Rio Grande do Sul, Brazil, were finished in integrated crop-livestock system. We selected the 12 sheep that showed the highest number of nematode eggs per gram of faeces to search for worms in the gastrointestinal tract. Haemonchus contortus and Trichostrongylus colubriformis were the major parasites. H. contortus presented mean intensities of 1,159 and 257 worms in 2015 and 2016, respectively. T. colubriformis displayed mean intensities of 4,149 and 2,427 worms in 2015 and 2016, respectively. Of the 127 male specimens of Haemonchus spp. analysed by Polymerase Chain Reaction (PCR), 125 were H. contortus, one Haemonchus placei and one hybrid. Other species detected were Cooperia punctata , Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Cooperia curticei, Ostertagia ostertagi, Teladorsagia circumcincta , Trichostrongylus axei, Nematodirus spathiger , and Trichuris ovis. Twenty lambs presented cysts of Taenia hydatigena in the liver and mesentery. One lamb presented Coenurus cerebralis, the larval stage of Taenia multiceps, in the brain. In conclusion, sheep from pasture shared with cattle presented a high diversity of nematode species. H. contortus and H. placei co-infection occur with consequent hybridization.

Resumo A ocorrência de infecções helmínticas foi avaliada em ovinos que compartilhavam pastagem com bovinos. Em 2015 e em 2016, cordeiros machos foram adquiridos em Santana do Livramento, Rio Grande do Sul, para serem terminados em sistema de lavoura - pecuária (ILP). Em cada ano, 12 cordeiros que tinham maior contagem de ovos nas fezes foram abatidos para recuperação dos vermes. Haemonchus contortus e Trichostrongylus colubriformis foram as principais espécies registradas. H. contortus apresentou intensidade média de 1159 e 257 vermes em 2015 e 2016, respectivamente. T. colubriformis apresentou intensidade média de 4149 e 2427 parasitas em 2015 e 2016, respectivamente. De 127 machos de Haemonchus spp. analisados por "Polymerase Chain Reaction" (PCR), 125 foram identificados como H. contortus, um como Haemonchus placei e um como híbrido. Cooperia punctata, Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Cooperia curticei, Ostertagia ostertagi, Teladorsagia circumcincta , Trichostrongylus axei, Nematodirus spathiger e Trichuris ovis foram as outras espécies de nematódeos registradas. Vinte cordeiros apresentaram cistos de Taenia hydatigena no mesentério e no fígado. Um cordeiro apresentou no cérebro Coenurus cerebralis, o estágio larval de Taenia multiceps . Em conclusão, ovinos criados com bovinos apresentam grande diversidade de nematódeos. A co-infecção de H. contortus e H. placei favorece a produção de híbridos.

Serological study of brucellosis in Argentine Creole sheep / Estudio serológico de brucelosis en ovejas criollas de Argentina

Ovine cattle was introduced into America during the Spanish conquest with the second journey of Columbus to the Antilles and was disseminated throughout the region. In 1587, sheep were introduced into Argentina, later developing into the "Creole" breed. We selected 486 animals from different Argentine provinces with the aim of determining the serological status of brucellosis caused by Brucella melitensis and Brucella ovis. For the detection of antibodies against smooth Brucella spp., the Rose Bengal test (RBT) was performed as screening test while the serum agglutination test (SAT) and 2 mercapto-ethanol (2ME) were run as a confirmatory technique. Moreover, for the detection of antibodies against rough Brucella spp., we used the rapid slide agglutination test (RSAT) for screening and an indirect ELISA (IELISA) as confirmatory assay. This study showed that the total positive percentage of brucellosis due to B. ovis was 2.9%. Excluding the animals mixed with the Suffolk breed; seropositivity would be 0.6%. All animals tested negative for brucellosis caused by B. melitensis.

El ganado ovino fue introducido en América durante el segundo viaje de Colón a las Antillas y rápidamente se diseminó por la región. En 1587 entraron a la Argentina las primeras ovejas, estas se adaptaron a las condiciones naturales y se desarrolló así la denominada «oveja criolla¼. Se seleccionaron 486 animales de diferentes provincias para conocer el estado serológico de la enfermedad producida por Brucella melitensis y Brucella ovis. Para detectar anticuerpos anti-Brucella en fase lisa se utilizó la prueba de rosa de Bengala (RBT) como tamiz y como confirmatorias seroaglutinación lenta en tubo (SAT) y 2-mercaptoetanol (2ME). En fase rugosa se realizó como tamiz la prueba rápida de aglutinación (RSAT) y ELISA indirecto como prueba confirmatoria (IELISA). Este estudio mostró un porcentaje de seropositividad de brucelosis causada por B. ovis del 2,9%. Excluyendo los animales cruzados con la raza Suffolk, la seropositividad sería del 0,6%. Todos los animales fueron negativos a brucelosis causada por B. melitensis.

Duplex nested-PCR for detection of small ruminant lentiviruses

Abstract Small ruminant lentiviruses (SRLV) have high genetic variability which results in different viral strains around the world. This create a challenge to design sensible primers for molecular diagnosis in different regions. This work proposes a protocol of duplex nested-PCR for the precise diagnosis of SRLV. The technique was designed and tested with the control strains CAEV Co and MVV 1514. Then, field strains were submitted to the same protocol of duplex nested-PCR. Blood samples of sheep and goats were tested with AGID and nested PCR with specific primers for pol, gag and LTR. The AGID results showed low detection capacity of positive animals, while the nested PCR demonstrated a greater capacity of virus detection. Results demonstrated that LTR-PCR was more efficient in detecting positive sheep samples, whereas gag-PCR allowed a good detection of samples of positive goats and positive sheep. In addition, pol-PCR was more efficient with goat samples than for sheep. Duplex nested PCR performed with standard virus samples and field strains demonstrated that the technique is more efficient for the detection of multiple pro-viral DNA sequences. This study demonstrated a successful duplex nested PCR assay allowing a more accurate diagnosis of SRLV.

Application of different techniques to detect Toxoplasma gondii in slaughtered sheep for human consumption / Utilização de diferentes técnicas para detecção de Toxoplasma gondii em ovinos abatidos para consumo humano

Abstract The aim of this study was to investigate occurrence of Toxoplasma gondii in sheep slaughtered in the state of Alagoas, Brazil, by means of different diagnosis techniques. Serum samples and tissues from 100 slaughtered sheep were used. To detect antibodies, the indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) was used, and tissues from seropositive animals (cut-off ≥1:64) were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) and immunohistochemistry (IHC). To assess the concordance between the direct techniques, the kappa test was used. In the IFAT, it was observed that 14% (14/100) of the ovine samples were serum-positive. In the PCR, 21.43% (3/14) of the animals were positive and in IHC, it was observed that 7.14% (1/14) were positively stained for T. gondii in cerebral tissue. Histopathologically, the predominant finding was the presence of mononuclear cell infiltrate in the heart and a perivascular cuff in the cerebrum and cerebellum. The concordance between the direct diagnosis techniques was moderate (k=0.44). Thus, it is important to use different direct techniques in diagnosing toxoplasmosis in naturally infected sheep.

Resumo O objetivo deste estudo foi pesquisar a ocorrência de Toxoplasma gondii em ovinos abatidos no Estado de Alagoas, Brasil por meio de diferentes técnicas de diagnóstico. Foram utilizadas amostras de soros e tecidos de 100 ovinos abatidos. Para a pesquisa de anticorpos foi utilizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), e os tecidos dos animais soropositivos (ponto de corte ≥1:64) foram submetidos às técnicas de Reação de Cadeia da Polimerase (PCR) e Imunohistoquímica (IHQ). Para o estudo da concordância entre as técnicas diretas foi empregado o teste Kappa. Na RIFI, 14% (14/100) das amostras foram soro-positivas. Na PCR, 21,43% (3/14) dos animais foram positivos e, na IHC, 7,14% (1/14) apresentaram marcação positiva para T. gondii no tecido cerebral. Na histopatologia, o achado predominante foi o infiltrado celular mononuclear no coração e manguito perivascular no cérebro e cerebelo. A concordância entre as técnicas diretas de diagnóstico foi moderada (K= 0,44). Desse modo, é importante utilizar diferentes técnicas diretas no diagnóstico da toxoplasmose em ovinos naturalmente infectados.

Use of ELISA based on NcSRS2 of Neospora caninum expressed in Pichia pastoris for diagnosing neosporosis in sheep and dogs / Utilização de um ELISA baseado em NcSRS2 de Neospora caninum expressa em Pichia pastoris para diagnóstico de neosporose em ovinos e cães

Neosporosis is a disease caused by the protozoon Neospora caninum that leads to significant economic losses in many countries. In the present study, we report on use of the recombinant protein NcSRS2 of N. caninum expressed in Pichia pastoris in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) for diagnosing neosporosis infection in sheep and dogs. We observed that the ELISA test yielded specificity of 94.5% and sensitivity of 100% for sheep and specificity of 93.3% and sensitivity of 100% for dogs. We observed that the sensitivity was higher than shown by the indirect fluorescent antibody test, and this was confirmed by means of Western blot. The results from this study suggest that the recombinant protein expressed in P. pastoris is a suitable antigen for use in immunodiagnosis to detect N. caninum in two important species exposed to this parasitosis.

A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum que leva a perdas econômicas importantes em muitos países. No presente estudo, é descrita a utilização da proteína recombinante NcSRS2 de N. caninum expressa em Pichia pastoris em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico de infecção por Neospora em ovelhas e cães. Observou-se, que utilizando-se um ELISA, o teste produziu uma especificidade de 94,5% e uma sensibilidade de 100% para ovinos; e uma especificidade de 93,3% e sensibilidade de 100% para cães. Uma maior sensibilidade foi observada em relação à IFI que foi confirmada por Western blot. Os resultados deste estudo sugerem que a proteína recombinante expressa em P. pastoris é bom antígeno para ser utilizado no diagnóstico imunológico para detectar N. caninum em duas espécies importantes expostas a esta parasitose.

Monitoring of parasitic cysts in the brains of a flock of sheep in Egypt / Monitoramento de cistos parasitários no cérebro de um rebanho de ovinos no Egito

Cerebral parasitic cysts constitute a major problem for livestock. Among these, coenurosis and toxoplasmosis are predominant. Here, a total number of 60 sheep obtained from a private farm in Suez province, Egypt, were examined postmortem to detect visible parasitic cysts, and microscopically to detect small-sized entities. Necropsy revealed bladder-like cysts measuring 0.5-6.5 cm in diameter that were filled with a translucent fluid containing a large number of protoscolices. Accordingly, the cysts were identified as the metacestode Coenurus cerebralis. Among the sheep examined, 11 animals (7 males and 4 females) (18.3%) were infected. Most of the cysts were located in the cerebral hemispheres, with numbers ranging from one to three per infected animal. The effect of the presence of cysts in the brain tissue was evaluated. Histopathologically, pseudocysts of the apicomplexan Toxoplasma gondii were found in two animals with no detectable inflammatory cell reactions. In conclusion, coenurosis and toxoplasmosis are serious parasitic problems that play a significant role in sheep management in Egypt, as a result of close contact between livestock and dogs and cats, which play a critical role in the life cycle of these parasites.

Cistos cerebrais parasitários constituem um grande problema para o gado. Entre estes, coenurosis e toxoplasmose são predominantes. Aqui, um número total de 60 ovelhas obtidas em uma fazenda particular na província Suez, Egito, foram examinadas post-mortem para a detecção de cistos parasitários visíveis e microscopicamente para detectar cistos de pequenas dimensões. A necropsia revelou cistos medindo entre 0,5-6,5 cm de diâmetro, preenchidos com um fluido transparente, contendo um grande número de protoscolices. Por conseguinte, os cistos foram identificados como o metacestóide Coenurus cerebralis. Entre as ovelhas examinadas, 11 animais (7 machos e 4 fêmeas) (18,3%) estavam infectados. A maior parte dos cistos estavam localizados nos hemisférios cerebrais, com números variando de um a três em ovinos infectados. O efeito da presença de cistos no tecido do cérebro foi avaliado. Histopatologicamente, pseudocistos de Toxoplasma gondii foram encontrados em dois animais sem reações inflamatórias detectáveis. Em conclusão, coenurosis e toxoplasmose são graves problemas parasitários que desempenham um papel significativo no manejo de ovelhas no Egito, como resultado do contacto íntimo dos animais com os cães e gatos, que desempenham um papel crítico no ciclo de vida desses parasitas.

First identification of Mycobacterium avium paratuberculosis sheep strain in Argentina

We here identified for the first time the presence of Mycobacterium avium paratuberculosis (MAP) sheep (S) strain in Argentina. IS900 polymerase chain reaction (PCR) was positive. The S strain was compared with MAP cattle (C) strains by using IS1311 PCR-restriction endonuclease analysis (PCR-REA), multiplex PCR and restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis.

Doenças de caprinos diagnosticadas na região Central no Rio Grande do Sul: 114 casos / Diseases of goats diagnosed in the Central region of Rio Grande do Sul, Brazil: 114 cases

A retrospective study of the goat necropsies performed over a period of 48 years (1964 to 2011) at the Laboratório de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Rio Grande do Sul (RS) state, Brazil, was performed. A total of 114 reports of goat necropsies were analyzed. Ninety five necropsies (83.33%) had a conclusive diagnosis and 19 (19.66%) had inconclusive diagnosis. Out of the conclusive cases, infectious and parasitary diseases were the most prevalent, followed, in decreasing order of prevalence, by metabolic and nutritional diseases, poisonings and toxi-infections, and developmental diseases. Other conditions or lesions that did not fit any of the above groups of diseases affected about 10% of the necropsied goats. Hemonchosis was the most prevalent cause of death in this study. Eimeriosis and listeriosis were also important causes of goat deaths. Among the metabolic and nutritional diseases, urolithiasis, osteoporosis, pregnancy toxemia, malnutrition, and white muscle disease were the most prevalent. Mostly the infectious and parasitary diseases and the metabolic and nutritional diseases occurred many times as outbreaks, causing even more important economic losses.

Foi realizado um estudo retrospectivo dos arquivos do LPV-UFSM e examinados os laudos de necropsias de caprinos realizadas num período de 48 anos (1964 a 2011). Foram analisados 114 laudos de necropsias de caprinos. Deste total, 95 (83,33%) tinham diagnóstico conclusivo e 19 (19,66%) tinham diagnóstico inconclusivo. Dos 95 casos conclusivos, as doenças infecciosas e parasitárias foram as mais prevalentes, seguidas em ordem decrescente de prevalência, pelas doenças metabólicas e nutricionais, intoxicações e toxi-infecções e alterações do desenvolvimento. Outras alterações de diferentes naturezas e etiologias que não se enquadravam nos grupos de doenças acima afetaram cerca de 10% dos caprinos examinados. A hemoncose foi a principal causa de morte de caprinos na área de abrangência do LPV-UFSM. Eimeriose e listeriose também foram causas importantes de morte. Dentre as doenças metabólicas e nutricionais, urolitíase, osteoporose, toxemia da prenhez, desnutrição e doença dos músculos brancos foram as mais prevalentes. Principalmente as doenças infecciosas e parasitárias e as metabólicas e nutricionais ocorreram muitas vezes na forma de surtos, acarretando maiores perdas econômicas associadas.

Clinical evaluation of nervous ketosis induced by isopropanol in sheep / Manifestações clínicas da cetose nervosa induzida por isopropanol em ovinos

Twelve healthy Santa Ines sheep, non-pregnant and non-lactating underwent a protocol of experimental induction of nervous ketosis for studying the symptoms in ketosis and Pregnancy Toxaemia (PT) disease. Eight animals were subjected to infusion of 150 mL of isopropanol (IPA) at 35% in the jugular vein and four sheep were treated identically with isotonic saline solution (NaCl 0.9%) during 40 minutes. The animals treated with IPA showed increased heart rate (HR) after 40 minutes of infusion and decreased ruminal movement from the 10 minutes infusion with IPA and remaining low up to 10 minutes from the end of the infusion. Ruminal atony appeared in three animals, which showed slight meteorism gas. Infusion of IPA caused the appearance of nervous symptoms as depression, staggering, adduction of hind limbs, head pressing, teeth grind and blindness almost always accompanied by a decreased pupillary reflex and nystagmus. All the animals exhaled ketosis breath with strong odor within few minutes of the start of induction that helped the elimination of the IPA from the organism. The present results strongly suggest that part of the nervous symptoms observed in PT may be derived from the action of IPA. These present findings open new perspectives for a better understanding of the pathogenesis of PT in sheep...

Doze ovelhas hígidas, não prenhes e não lactentes foram submetidas a um protocolo de indução experimental de cetose nervosa para a avaliação de sintomatologia nos quadros de cetose e Toxemia da Prenhez. Neste protocolo, oito animais foram submetidos a infusão de 150 mL de solução de isopropanol a 35% na veia jugular, constituindo o grupo Tratado (GT), e quatro ovinos foram tratados identicamente com solução salina isotônica (NaCl 0,9%), constituindo o grupo Controle (GC) no decorrer de 40 minutos. Os animais do GT apresentaram aumento da frequência cardíaca (FC) aos 40 minutos de infusão e redução no movimento ruminal a partir dos 10 minutos de infusão com isopropanol, o qual permaneceu diminuído ate 10 minutos do termino da infusão. A atonia ruminal ocorreu em três animais, que manifestaram em seguida leve meteorismo gasoso. A infusão de isopropanol provocou o surgimento de sintomas nervosos como, depressão e sonolência, cambaleios, adução de membros posteriores, pressão da cabeça em obstáculo, ranger de dentes e cegueira quase sempre acompanhada de diminuição do reflexo pupilar e nistagmo. Todos os animais exalaram forte odor cetótico com poucos minutos do inicio da indução, fato que ajudou a eliminação do isopropanol do organismo. Os presentes resultados sugerem que parte dos sintomas nervosos verificados na Toxemia da Prenhez possa ser oriunda da ação do isopropanol. Estes resultados abrem novas perspectivas para o melhor entendimento da patogenia da Toxemia da Prenhez em ovinos...

Development of a real-time SYBR Green PCR assay for the rapid detection of Dermatophilus congolensis

Methods such as real time (RT)-PCR have not been developed for the rapid detection and diagnosis of Dermatophilus (D.) congolensis infection. In the present study, a D. congolensis-specific SYBR Green RT-PCR assay was evaluated. The detection limit of the RT-PCR assay was 1 pg of DNA per PCR reaction. No cross-reaction with nucleic acids extracted from Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, or Austwickia chelonae was observed. Finally, the RT-PCR assay was used to evaluate clinical samples collected from naturally infected animals with D. congolensis. The results showed that this assay is a fast and reliable method for diagnosing dermatophilosis.

Acute phase proteins: a potential approach for diagnosing chronic infection by Trypanosoma vivax / Proteínas de fase aguda: uma possível abordagem para diagnóstico de infecção crônica por Trypanosoma vivax

The present study aimed to assess potential changes in acute phase proteins in sheep experimentally infected with Trypanosoma vivax. There were studied eight male sheep, four used as controls and four infected with 10(5) T. vivax trypomastigotes. Blood samples were collected at two points times before infection and then at 5,7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 and 120 days post-infection (dpi). Blood samples were centrifuged and allotted, and acute phase proteins were then separated by electrophoresis on acrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate. Protein concentrations were determined by computer-assisted densitometry. Total protein was determined by colorimetric biuret method. Trypanosomes were counted daily using a 5 mL aliquot of blood smear on a glass slide under a 22 × 22 mm coverslip. Parasites were counted in 100 microscopic fields (40× magnification), and then multiplied by a correction factor. The results were expressed as parasites per mL of blood. For statistical analyses, we used the Wilcoxon test at 5% significance level. There was found a reduction in several acute phase proteins and increase in antitrypsin and transferrin. This finding can be used for the diagnosis of T. vivax infection, especially in chronic infection.

O objetivo do presente estudo foi verificar possíveis alterações nas proteínas de fase aguda em ovinos infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Para tanto, foram utilizados oito ovinos machos, sendo quatro usados como controle e quatro infectados com 10(5) tripomastigotas de T. vivax. Colheram-se amostras de sangue em dois tempos antes da infecção e, posteriormente, aos 5, 7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 e 120 dias após a infecção (dpi); após centrifugação e aliquotização das amostras. As proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em gel de acrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio, e suas concentrações foram determinadas através de densitometria computadorizada. A dosagem de proteína total foi realizada pelo método colorimétrico do biureto. A contagem dos tripanossomas foi realizada diariamente, utilizando-se uma alíquota de 5 µL de sangue disperso em lâmina de microscopia, sob lamínula de 22 × 22 mm, contando-se os parasitos em 100 campos microscópicos, com objetiva de 40×, multiplicados pelo fator de correção do microscópio, e o resultado expresso em parasitos por mL de sangue. Para a análise estatística, empregou-se o teste de Wilcoxon a 5% de probabilidade. Foi observada a diminuição de diversas proteínas de fase aguda e aumento de antitripsina e transferrina que podem ser utilizadas para auxiliar no diagnóstico da infecção por T. vivax, principalmente na fase crônica da infecção.

Serological survey of Neospora caninum in small ruminants from Pernambuco State, Brazil / Inquérito sorológico de Neospora caninum em pequenos ruminantes do estado de Pernambuco, Brasil

Neospora caninum infection is an important cause of bovine abortion as well as neonatal mortality in goats and sheep. A serological survey for antibodies against N. caninum in goats and sheep was carried out in the municipality of Ibimirim, PE, Northeastern Brazil. The imunnofluoresce antibody test showed that 26.6 percent (85/319) of the goats and 64.2 percent (52/81) of the sheep were positive. Serologic reactivity was associated with age in goats (p < 0.01) and sheep (p > 0.05), with increasing rates in older animals. These results indicate exposure to N. caninum among small ruminants in the study area.

A infecção por Neospora caninum é uma importante causa de abortos em bovinos, assim como mortalidade neonatal em caprinos e ovinos. Uma pesquisa sorológica de anticorpos anti-N. caninum foi realizada no município de Ibimirim (PE, Brasil). Os resultados ao teste de imunofluorescência revelaram que 26,6 por cento (85/319) dos caprinos e 64,2 por cento (52/81) dos ovinos foram positivos. A reatividade à sorologia foi associada com a idade nos caprinos (p < 0,01) e ovinos (p > 0,05), com maior ocorrência nos animais mais velhos. Estes resultados indicam exposição a N. caninum entre pequenos ruminantes na área estudada.